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一、方案背景與目標

新鮮農產品的游離氨基酸特征譜可反映其營養價值（如支鏈氨基酸助力運動后恢復）與風味特征（如 L - 谷氨酸呈鮮味、L - 甘氨酸呈甜味），是育種項目關注的核心性狀。本方案旨在提供一種無需衍生化、樣品制備簡單的 LC/MS/MS 方法，實現番茄勻漿中游離氨基酸的精準定量分析。

二、核心儀器與試劑

1. 儀器設備

分析系統：EClassical 3200L 高效液相色譜儀 + MS2 Vertical 9100 三重四極桿質譜儀

控制與數據處理軟件：Simplicity? M 3Q 軟件平臺

輔助設備：3kDa 過濾器、離心機、Triple Red 水純化儀

2. 主要試劑

乙腈、甲酸、氨基酸標準品、氘化氨基酸標準品（內標）、去離子水（由 Triple Red 水純化儀制備）

三、實驗流程

1. 方法轉移與參數優化

將 Syngenta 氨基酸含量測定內部方法直接轉移至 EClassical 3200L 系統，無需修改；通過注入高濃度標準溶液（L1 級），優化 MS/MS 離子對的入口電壓與碰撞能量。

2. 校準曲線制備

配制 7 點校準曲線，包含多種濃度的目標氨基酸與固定濃度的氘化內標（內標濃度見表 1）；

內標種類：2,3,3,3-d4 - 丙氨酸、檸檬酸 - 2,2,4,4-d4、DL - 谷氨酸 - 2,3,3,4,4-d5、DL-d5 - 苯丙氨酸等。

3. 樣品前處理

番茄樣品勻漿后離心，取上清液；

用 3kDa 過濾器過濾上清液，所得液體用去離子水稀釋 400 倍（確保濃度在校準范圍內）；

加入與校準標準品同水平的氘化內標。

4. 分析參數設置

LC 參數：柱溫 30℃；流動相 A 為 “水 + 0.2% 甲酸”，流動相 B 為 “乙腈 + 2% 水 + 0.2% 甲酸”；梯度洗脫程序按時間調整流速與 A/B 比例（詳見表 2）；

質譜參數：ESI 離子源（正電壓 5500V、負電壓 - 4000V），離子源溫度 315℃，HSID 溫度 200℃，干燥氣 60，霧化氣 350；各氨基酸離子對與碰撞能量見表 3。

四、方案結果

分離與靈敏度：該方法可實現不同游離氨基酸的良好色譜分離，MS2 Vertical 9100 質譜檢測器靈敏度高，能精準捕捉目標化合物信號；

線性與檢出限：所有氨基酸線性相關系數 R2 均 > 0.98（部分如天門冬酰胺 R2=0.999），LOQ（定量限）低（低 0.005μg/mL，如組氨酸、甜菜堿、脯氨酸等），滿足微量分析需求（詳見表 5）；

代表性數據：天門冬酰胺、絲氨酸等氨基酸的校準曲線線性優異（見圖 1），不同濃度校準品與番茄樣品的色譜圖重疊度高，分離效果清晰（見圖 2）。

五、方案結論

Syngenta 內部方法可直接轉移至依利特 EClassical 3200L-MS2 Vertical 9100 系統，無需修改，適用性強；

方法無需對游離氨基酸進行衍生化，樣品前處理簡單、效率高；

所有目標化合物檢測選擇性好、靈敏度高、線性關系優異，可高效用于番茄勻漿中游離氨基酸的定量分析。

注：更多詳情（含完整表格 1-5、譜圖數據）請下載 PDF 文件查看。